對于分光光度計而言，90%的故障均為光路原因，所以當儀器使用者遇到儀器有故障或者平常維護保養時，首先要做到四個自查步驟。這四個步驟分別是：波長準確度、基線平直度、基線噪聲和光源能量。

1、波長準確度的檢查和確認

關于儀器波長準確度的確認一般有兩種方式：一種是儀器自帶的確認功能；另一種是使用標準器具——鈥玻璃來確認。

所謂使用儀器自帶的功能實際上就是利用氘燈本身的486.0nm或656.1nm的特征譜線來確認。這種自檢也有兩種方式：一種是通過儀器在初始化完成后的顯示數值結果來確認；另一種是通過掃描的氘燈圖譜來確認。分別見下圖-1，圖-2所示：

使用儀器自帶的波長準確度的檢查功能雖然簡單易行，但是有一定的局限性，那就是只能檢查486 nm和656.1nm兩個波長位置的精度，而不能反映出整個波長范圍的波長精度。

目前的分光光度計的使用波長范圍大概都在190～1100nm區域，由于儀器的波長正弦結構的三點（即短波-中波-長波）統調的機械誤差，可能在整個區域的某一區間內的波長誤差很大；此時，就需要使用專用的鈥玻璃來確認了。使用鈥玻璃確認波長準確度的測試特征圖譜見圖-3所示：

圖-3鈥玻璃的特征譜線（紅框里數據為常用參考波長值）

2、基線平直度的檢查和確認

基線平直度（或稱平坦度）是確保測試結果準確與否的重要指標。

眾所周知，短跑運動員在比賽時要站在同一起跑線上，目的是為了到達終點后客觀公正地比較各位運動員的用時多少，用以評估成績。形象地講，基線就類似這條起跑線。但是，據我所知，許多儀器操作者往往忽略基線平直度的檢查甚至不清楚基線平直度的重要性，結果造成檢測的誤差。

關于基線平直度的指標，各個廠家的技術指標有所不同，例如圖-4例舉的基線平直度的要求是小于±0.001Abs

圖-4正常的基線平直度

  下圖是異常的基線平直度例子：

圖-5異常的基線平直度（未做基線校正的結果）

3、基線噪聲的檢查和確認

一般儀器說明書上給出的基線噪聲指標是狹義的概念，具體方法就是在某一個波長下（一般是500nm），做一個時間掃描，看看所測得的噪聲的最大峰-峰值的范圍是多大。例如圖-6所示：

圖-6儀器基線噪聲檢測方法

但是我這里指的基線噪聲是廣義的噪聲檢查。尤其是儀器采用波長掃描的工作方式，更要做一個大波長范圍的基線噪聲檢查，這個檢查的重要性不言而喻。通過這個廣義的檢查可以發現儀器的當前的狀態正常以否。例如異常基線噪聲的例子如下圖所示：

圖-7異常的基線噪聲（200～600nm）

4、光源能量的檢查和確認

關于前三項檢查的內容我相信許多儀器的操作者都做過或者認可；但是對于光源能量的確認的重要性，可能大多數人并不知曉。

我們知道，影響分光光度計測試重現性和準確性的一個重要指標就是信噪比(S/N),但是影響信噪比的一個關鍵因素就是光源強度的大小；而影響光源強度的因素又有：光源燈、光源鏡、濾光片、透鏡、反光鏡、狹縫、石英窗、檢測器等等。所以說光源能量的檢查和確認可以從一個側面反映出儀器的當前狀態，因此是一個重要的必不可少的重要環節。下面就是氘燈和鎢燈的能量檢測記錄圖譜：

圖-8氘燈能量圖譜

 圖-9鎢燈能量圖譜

關于光源能量圖譜檢查的說明：

① 由于各個廠家儀器設計的不同，其光源能譜的強度值也是不同的，所以相互之間沒有可比性，只有儀器本身的前后自我比對。

② 儀器在做光源能量定期檢查時，儀器的各項參數的設置始終要一致，否則得到的記錄圖譜失去了可比性。

③ 從道理上講，這個檢查應該在儀器初期啟用時就應該做首次記錄，其目的是為了今后以此記錄作為原始參考資料。但是遺憾的是，大部分儀器使用者并不知道這個檢查的必要性和重要性。如果以前沒有做過這項檢查，那么現在趕緊補救還是有一定的參考價值。

注：上述四項自檢過程在一些沒有掃描功能的低檔儀器中是較難完整實現的。

（內容來源儀器信息網）