一、超高效液相色譜介紹

超高效液相色譜（Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC）是分離科學中的一個全新類別，UPLC借助于HPLC（高效液相色法）的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統體積及快速檢測手段等全新技術，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。超高效液相色譜是一個新興的領域，作為世界第一個商品化UPLC產品的Waters ACQUITY UPLCTM超高效液相色譜系統在1996年問世，之后像安捷倫、島津等公司也陸續開始生產超高效色譜儀。目前，超高效液相色譜儀已經開始逐漸地投入液相實驗中。

二、超高效液相色譜技術參數

列舉部分儀器的個別參數，供參考：

1、泵系統

最大操作壓力 15000psi（1mL/min）

流速范圍：0.001-2.000mL/min, 增量0.001mL；

流速精度：0.075% RSD；

流速準確度：±0.5%；

梯度準確度：± 0.3%；

梯度精度：0.15%RSD；

壓力范圍：0-15,000 psi；

真空脫氣機：在線真空脫氣，六通道均可在線脫氣，有自動柱塞清洗和進樣針清洗功能。

2、溫控自動進樣器

進樣精度：<0.3%RSD；

進樣準確度：±1 μl；

進樣線性度：> 0.999；

進樣體積：0.1 to 50 μL，增量0.1μL；

樣品污染度：<0.004%；

樣品溫度范圍：4°C -40°C，增量：1°C，帶制冷功能；

溫控穩定性：±0.5℃；

樣品盤數：96，384 兩種規格；

樣品瓶：2mL樣品瓶，0.65mL,1.5mL兩種規格的離心管。

3、柱溫箱

溫度范圍：室溫以上5°C -90°C；

控溫精度：±0.1°C；

溫度準確性±0.5℃。

二極管陣列檢測器：

二極管數：≥1024；

波長范圍：190-800 nm；

分辨率：≤1.2 nm；

波長準確度：≤±1nm；

波長精度：≤±0.1nm；

基線噪音：＜±1.0×10-6AU；

基線漂移：＜1×10-4AU/h；

最大采集頻率：≥100 Hz；

4、檢測器配置 

紫外可見檢測器、光電二極管矩陣檢測器、蒸發光散射檢測器

三、超高效液相色譜解讀

UHPLC的標志性特點就是壓強高，進樣量少，死體積小，流速慢，出峰快。耐壓是首要的，然后就是色譜柱了，其次就是儀器系統的整體設計。對UHPLC來說，重點還是流量的精準和耐壓，還有就是延遲體積小，響應時間要夠快。

而對耐高壓系統的評價，一般12000psi可以耐受大部分的試驗條件，如果色譜條件更改導致壓力再提升，色譜柱的壽命可能會受影響，可能得不償失。對于絕大多數要進行成本核算的使用者來說。

有多少個方法的流速是需要設置到小數點后第三位的？絕大多數方法的流速是1.0ml/min或者0.8ml/min之類的設置，小數點后兩位的精度足夠我們用了。目前大多數色譜軟件識別色譜峰的保留時間窗都是5%。延遲體積，對于新開發的方法或者方法傳遞的要求而言，是越小越好。目前各廠家好像都能控制在500ul以下，甚至于100ul以下。

根據檢測的樣品來定小內徑小填料色譜柱的規格。

高靈敏小檢測池的檢測器，與普通LC檢測器相比，檢測器的耐壓，更高，靈敏度要高幾倍。DAD檢測器也很有門道，要達到更高的靈敏度和信噪比，目前的潮流是全反射光纖流通池。貌似Agilent的是 TeflonAF管的材質（比金子都貴的材料呀），也有用石英光纖的。Waters的流通池貌似改過幾版，老一些UPLC上的是掛在外面的粗棒子，新的放在機箱內了。

在流動相必須用緩沖鹽的情況下，部分實驗人員更愿意用HPLC。因為用UPLC的時候，對流動相和樣品的前處理要求明顯要高很多，不然極易堵柱和系統。對于大多數使用者來說，應該都是希望購買的不是最貴的，而是最合適的儀器。

（內容來源液相色譜之家）