1、液相色譜柱的活化

對于液相色譜柱而言，每根色譜柱在裝運之前都經過了測試，并存放在測試洗脫液中進行運輸。因此在首次使用時，反相柱建議80%的甲醇使用檢測樣品1/2的流速沖洗4小時，再用流動相徹底地平衡色譜柱即可進樣分析。如果使用流動相添加劑（如緩沖液或離子對試劑），建議使用含原有比例但不含這些添加劑的流動相進行中間過渡10至20個色譜柱體積再更換成分析樣品流動相。對于具有較短化學鏈（例如C8、苯基、CN）鍵合相的色譜柱，應小心確保在使用色譜柱之前對其進行徹底的平衡。這樣可確保重復性，并有助于防止保留時間的漂移。

正相溶劑和反相溶劑是不互溶的，這一點不能忽略。對于新購柱子，首先請注意打開分析測試說明書，了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與你將要使用的流動相不互溶，請先用異丙醇過渡。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大，會導致柱壓升高，適當調低流速。如果流動相中含有緩沖鹽類，先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡，避免緩沖鹽的析出。

2、C18色譜柱的活化

C18色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，是中國藥典特征譜圖唯一指定的色譜柱，也是最常用的液相色譜柱之一。對于拿到一根新C18柱的時候應該怎樣進行活化及維護呢？

新柱活化，實際上是一個平衡的過程，色譜柱在運輸和儲存過程中，有可能出現(xiàn)柱內溶劑揮發(fā)的情況，導致填料干掉，鍵合相得不到充分潤濕，因此需要活化。按照廠家色譜柱說明書的操作進行活化即可。除了用流動相平衡外，有時候還必須用所測樣品對新柱進行平衡，具體平衡方式也很簡單，把前面用來平衡的進樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進樣多針。用待測物對新柱平衡，目的是將硅膠基質填料表面具有非特異性吸附的位點的吸附能力飽和掉。

C18柱會用甲醇從小流量到大流量慢慢活化，因為低流速的甲醇可以很好的浸潤固定相，使鍵合相很好的伸展，用溶劑平衡好系統(tǒng)后，可以采取多次進樣或者加大進樣量的方式以更快的獲得重現(xiàn)的色譜圖，這樣用樣品將色譜柱中的活性位點飽和，就不會出現(xiàn)異常色譜現(xiàn)象的情況。