液相色譜檢測中,柱壓是非常重要的一個儀器參數,需要時刻關注柱壓情況,當柱壓偏高時是哪些原因造成的呢,怎么解決呢?
1、色譜柱保存不當
色譜柱如較長時間不用,重新啟用后需按說明書的活化方法重新活化后再使用,否則會出現柱壓升高,柱效下降。
除另有規定外,一般反相色譜柱都需保存在高比例有機相中,以防止微生物滋生。否則重新啟用時,會因微生物滋生而導致柱壓異常升高,這種情況可以嘗試用乙腈-水-TFA=50-50-0.1低流速過夜沖洗色譜柱。
2、樣品污染
待檢測樣品成分復雜,部分成分死吸附在柱頭端,導致柱壓升高,柱效下降。這種情況下建議采用小孔徑的濾頭或濾膜(如0.22μm)進行過濾后再進樣,以盡量減少污染物進入色譜柱。
中藥項目往往樣品會比較臟,使用一定時間后,會因柱頭污染導致色譜柱性能下降,這種情況下可將色譜柱反接并按說明書的沖洗方法進行沖洗。
也可以加保護柱,保護柱為一種犧牲式攔截污染,有一定的使用壽命。做的過程中關注柱壓,如柱壓升高10%,則需更換保護柱芯。有些柱溫箱無法放入保護柱,則可嘗試將保護柱接在柱前,進樣品后,但這種情況需對比不加保護柱的分析圖譜,確定沒有因保護柱與檢測色譜柱的柱溫差異而產生色譜圖差異的情況下,才可以使用。
還要注意定期維護色譜柱,對于確認是樣品污染導致色譜柱使用一段時間柱效下降的,建議對該項目使用的色譜柱反接后按說明書的異常再生方法進行定期維護,這種處理的好處是能減少柱子污染物聚集,延長色譜柱使用壽命。
檢測蛋白類樣品,容易因蛋白聚集導致柱壓升高,柱效下降,這種情況可以用乙腈-水-TFA=50-50-0.1低流速過夜沖洗色譜柱。
(內容參考儀器信息網)