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行業應用

蔬果中維生素C含量的檢測方法

時間:2015-11-4 9:41:40      閱讀:1880

維生素C又叫抗壞血酸,廣泛存在于植物組織中,新鮮的水果、蔬菜中含量較多。是一種水溶性小分子生物活性物質,也是人體需要量最大的一種維生素。

維生素C具有還原性,可以與許多氧化劑發生氧化還原反應,因此可以利用其還原性測定維生素C的含量。

目前食品中測定維生素C含量的方法有碘量法、滴定法、原子吸收分光光度法(原子吸收分光光度計)、紫外可見分光度法(紫外可見分光光度計)、色譜法(液相色譜儀)、電化學法等。 

一、原子吸收分光光度法

利用原子吸收分光光度法問接測定維生素C的含量,是利用維生素C可以與一些金屬離子發生氧化還原反應,通過測定反應掉的金屬離子的量,進而間接計算出維生素c的含量。
1.1以銀離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法
    以銀離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法,是利用維生素C分子中的有二烯醇基具強還原性,可被硝酸銀氧化為去氫維生素C,同時產生黑色銀沉淀。
     
沉淀經離心分離后,將分離得到的沉淀用硝酸溶解后,再利用原子吸收分光光度計測定銀離子的含量,從而接測得維生素C含量,具體測定方法如下:
    
配制一系列濃度的維生素C標準溶液,依次吸取一定量的維生素C標準溶液置于10mL離心管中,分別加入2mL(1mg/mL) Ag+標準溶液,然后加水使總體積為4mL,搖勻,在室溫下避光放置35min離心分離棄去上清液,用2mL超純水洗滌沉淀3次,然后用l:1的濃硝酸3mL溶解沉淀,移入50mL的容量瓶中,加水稀釋至刻度。噴入空氣-乙炔火焰分別測定其吸光度,以維生素C標準溶液的濃度為橫坐標,以測得的吸光度值為縱坐標繪制標準曲線。最后將處理過的待測樣按上述方法測定其維生素C含量。
    
上述方法巾維生素C標準溶液及樣品的配制都是利用2%的檸檬酸作為溶劑,并在棕色瓶中保存,原因是維生素C在溶液中不穩定,遇氧氣、光、熱、堿性物質易受破壞,而在適當的酸性條件下比較穩定,用2%的檸檬酸溶液來配制維生素C標準溶液,減緩了維生素C被氧化的速度,同時消除了一定外界因素的十擾,使得測定結果比較穩定。
1.2 以銅離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法
    該方法是利用維生素C在酸性介質中維生素C可將Cu2+定量的還原為Cu+,然后Cu+SCN-反應生成CuSCN沉淀,在高速離心機下有效地分離出CuSCN沉淀,洗滌后再經濃硝酸溶解,用原子吸收法測定沉淀中的含銅量,即可推知樣品中維生素C的含量。具體測定方法如下:
    
分別吸取1mL配制的含一定量維生素C的標準溶液(隨配隨用)(分別含維生素C 50100200300400500 μg)和樣品提取液,依次放置于已編號的15mL離心管中,各加入1mLCuSO4飽和溶液、1mL濃度為2%硫氰酸銨溶液、0.5mL鹽酸-醋酸鈉緩沖液和0.5 mL飽和NaCl溶液充分混和,稍后離心分離,棄去上層清液,小心地用少量水洗滌沉淀23(注意每次用水不能超過1 mL),加入0.5mL硝酸溶解后,轉移至lO0mL的容量瓶中加水定容至刻度線,搖勻。分別用原子吸收分光光度計測定其含銅量,由所得的維生素C含量的標準曲線,可以得到相應樣品的試驗結果。
    
該方法所得的試驗結果相對標準偏差RSD5%以內加標回收率在96.56%~100.67%,其精密度和準確度均達到痕量分析要求。此方法的線性相關系數R=O 9989,表明相關性很好。

二、紫外可見分光光度法

利用紫外分光光度法測定維生素C的含量是基于維生素c在紫外光區有特征吸收,但是因為維生素C結構中具有不飽和鍵,具有還原性,不易穩定存在,直接測定誤差較大。所以在利用紫外分光光度法測定時,維生素標準溶液和待測樣的配制條件非常重要。曾國富,黃玉英研究發現,維生索CCTAB-C5H11OH-H2O微乳液體系中非常穩定,它存在于微乳液滴膜的內側,與滲透進入液滴膜外側的溶液氧接觸的機會極少,該體系能極大地提高維生素C的穩定性。
    
利用維生素C具有對紫外產生吸收和對堿穩定的特性,建立紫外分光光度快速測定水果、蔬菜維生素c的新方法。根據維生素C具有對紫外產生吸收和對堿不穩定的特性,于波長243nm處測定樣品溶液與堿處理樣品兩者吸光度之差,通過查校準曲線,即可計算樣品巾維生素C的含量。此法操作簡單、快速準確、重現性好,結果令人滿意。特別適合含深色樣品的測定。實驗結果表明該方法簡單易行,結果準確、靈敏度高,檢出限低,可快速測定水果、蔬菜中維生素C,值得推廣應用。
    
0450μgmL線性范圍內,以cu2+作催化劑,以溶解氧將還原型維生素C氧化為在246.0 nm處無吸收的氧化型Vc,實現了樣品各紫外干擾成分的本底校正,建立了種測定果蔬Vc的新方法。該方法中維生素C破壞條件的選擇尤為重要,確定條件為:Cu用量為30 g,反應溫度為70℃,反應時間為20min,加熱條件下,反應速度快,無需加掩蔽劑。方法簡便、快速、準確,測定了香蕉、西紅柿等果蔬中的VC含量,結果令人滿意。經多次實驗得出該方法RsD0.32%~0.89%之間,實際測定了香蕉、西紅柿等樣品中的VC的含量,檢出限為0.2791gmL,加標回收率在97.16%~100.18%之間 
三、高效液相色譜法

HPLC法具有檢測速度快、操作簡單、實驗結果可靠等特點。

HPLC檢測條件如下:
流動相0.1%草酸溶液,流速1.0 mL/min;檢測波長254 nm,進樣量5μL,柱箱溫度3O℃。該方法分析中受樣品中其他雜質的影響較小。測定草莓中維生素C的含量,回收率為97.4%~102.1%,說明該方法具有所需試劑少、穩定、操作簡便等特點。精密度實驗的相對標準偏差小于3%,說明該方法重復性和再現性都是比較高的。

 


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